Schritt 1: Lösen Sie das rohe Melanotan-I-Peptid in 100 ml gereinigtem Wasser und filtrieren Sie die Mischung durch eine 0,45-μm-Membran, um eine Rohpeptidlösung zu erhalten.
Schritt 2: Reinigen Sie das rohe Melanotan I-Peptid mithilfe der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC). Verwenden Sie eine DAC-HB50-Säule mit dynamischer axialer Kompression und einem Gradientenelutionsverfahren unter Verwendung der mobilen Phase A (0,05 Gew.-% Trifluoressigsäure in Wasser) und der mobilen Phase B (0,05 Gew.-% Trifluoressigsäure in Acetonitril). Überwachen Sie die Probe mit einem UV-Detektor und sammeln Sie die dem Zielpeak entsprechende Peptidlösung in Fraktionen.
Schritt 3: Nach der HPLC-Reinigung erhalten Sie 180 ml Melanotan I-Trifluoracetatlösung mit einer Reinheit von über 99 %; Konzentrieren Sie dies durch Rotationsverdampfung, um 50 ml Lösung zu erhalten.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >99 % Reinheit). Eluieren Sie 50 Minuten lang mit einem 2 %igen wässrigen Essigsäuresystem. Konzentrieren Sie das gesammelte Zielprodukt durch Rotationsverdampfung auf 80 ml und unterziehen Sie es dann den Vor--Lyophilisierungs- und Lyophilisierungsprozessen. Erhalten Sie schließlich 5,33 g hochreines Melanotan I-Peptid, was einer Ausbeute von 32,33 % entspricht.